一、專性厭氧菌的介紹

　　根據(jù)細(xì)菌生長對氧的需求，可分為專用需氧菌、兼性厭氧菌、專用厭氧菌和微需氧菌四類。

　　專用厭氧菌需要在嚴(yán)格的無氧氣體環(huán)境中生長，氧氣會對細(xì)菌產(chǎn)生毒性作用。一些厭氧菌在含有5%-10%二氧化碳的氣體環(huán)境中可以耐受低濃度氧氣。常見的專用厭氧菌有梭菌(如產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌、困難梭菌等。)、雙歧桿菌(如嬰兒雙歧桿菌、動物雙歧桿菌等。)、擬桿菌、梭菌、厭氧消化鏈球菌等。

　　二、厭氧培養(yǎng)環(huán)境的構(gòu)造

　　(1)用厭氧盒進(jìn)行通風(fēng)培養(yǎng)。有些厭氧箱可以同時(shí)進(jìn)行微生物操作，如接種箱，直接培養(yǎng)，操作簡便，成功率高，缺點(diǎn)是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室不具備，損耗大，對于小規(guī)模的培養(yǎng)試驗(yàn)，費(fèi)用較高。

　　(2)使用厭氧罐、厭氧盒或厭氧培養(yǎng)袋+厭氧氣袋，可在小或中空間制作厭氧環(huán)境，操作方便，無需任何復(fù)雜的專用設(shè)備，可在所有實(shí)驗(yàn)室使用，非常適合實(shí)驗(yàn)室中小型試驗(yàn)操作。

　　注：培養(yǎng)基必須與厭氧環(huán)境氣體循環(huán)，如試管、錐形瓶等容器，以確保塞的透氣性;培養(yǎng)平板容器時(shí)，必須確保平板容器具有良好的透氣性，不能用密封膜密封纏繞。

　　(3)液體培養(yǎng)基可采用覆蓋石蠟隔離氧氣的方法，如泡肉培養(yǎng)基、梭菌增菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配制分裝后，在培養(yǎng)基上方覆蓋約0.5-1cm厚的液體石蠟，然后進(jìn)行滅菌，無需使用厭氧培養(yǎng)箱或厭氧罐即可直接培養(yǎng)厭氧菌。

　　注：消毒前將石蠟覆蓋，在滅菌過程中，培養(yǎng)基中溶解的氧氣逸出，冷卻后石蠟將阻礙空氣中氧氣的進(jìn)入，可以較好地制造厭氧環(huán)境;培養(yǎng)基中還可補(bǔ)充一定量的還原性鐵粉或硫乙醇酸鈉、半胱氨酸等還原性成分，幫助維持厭氧環(huán)境。

　　(4)有些培養(yǎng)基不需要厭氧培養(yǎng)就能自然形成厭氧環(huán)境，如硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。靜置過程會自發(fā)分層，下層為無氧環(huán)境，無需任何厭氧設(shè)備或液體石蠟即可培養(yǎng)厭氧菌。

　　三、常見厭氧菌的培養(yǎng)基

　　1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

　　該培養(yǎng)基常用于梭菌的活化和增菌培養(yǎng)，也可用于一些營養(yǎng)要求較高的厭氧菌的培養(yǎng)。該培養(yǎng)基的靜置過程將自發(fā)分層，下層為無氧環(huán)境，無需任何厭氧設(shè)備或液體石蠟即可培養(yǎng)厭氧菌。

　　2.皰肉培養(yǎng)基

　　與硫醇酸鹽液培養(yǎng)基相比，這種培養(yǎng)基用液體石蠟覆蓋培養(yǎng)的梭菌能存活較長的時(shí)間(例如生孢梭菌，在硫醇酸鹽液培養(yǎng)基中僅能存活幾天，而在皰肉培養(yǎng)基中能存活幾個(gè)月)。

　　3.改良GAM培養(yǎng)基

　　這種培養(yǎng)基營養(yǎng)十分豐富，適合絕大多數(shù)厭氧菌的培養(yǎng)，尤其是較難培養(yǎng)的營養(yǎng)性苛刻細(xì)菌(如擬桿菌)。

　　4.血平板/CDC厭氧菌瓊脂

　　它營養(yǎng)豐富，適合絕大多數(shù)厭氧細(xì)菌的培養(yǎng)(可培養(yǎng)梭菌、擬桿菌等)。

　　5.MRS瓊脂/肉湯

　　制備 MRS肉湯液培養(yǎng)液澄清透明，不沉淀，常用于乳酸菌或雙歧桿菌的活化、增菌和采集菌體。

　　四、注意事項(xiàng)

　　(1)培養(yǎng)基的制備

　　覆有石蠟的液體培養(yǎng)基，在滅菌之前，應(yīng)將液體石蠟包裹起來;流體培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基在有氧條件下培養(yǎng)厭氧菌時(shí)，可用沸水浴或其它除氧方法將溶解的氧氣排出。

　　(2)操作過程

　　由于氧氣對厭氧菌有毒，整個(gè)操作過程應(yīng)在專用無氧設(shè)備中進(jìn)行。如果在正?？諝庵胁僮鳎瑥膮捬蹙┞对诳諝庵械絽捬醐h(huán)境培養(yǎng)結(jié)束，整個(gè)過程應(yīng)盡可能快，一般不超過15分鐘，暴露時(shí)間越長，厭氧菌越容易死亡。

　　(3)培養(yǎng)環(huán)境

　　厭氧環(huán)境可以通過厭氧罐、厭氧培養(yǎng)箱、厭氧氣包等方式提供。除了保證氣體環(huán)境無氧外，一些厭氧菌通常需要5%-10%的二氧化碳、氫等氣體來促進(jìn)生長，提高厭氧菌對氧氣的耐受性，更容易成功培養(yǎng)。